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當前位置:首頁技術文章RIA(放射免疫法)技術服務|實驗技術服務

RIA(放射免疫法)技術服務|實驗技術服務

更新時間:2015-06-02點擊次數:168

關鍵詞:RIA(放射免疫法)技術服務|實驗技術服務
簡介:世界*品牌RIA(放射免疫法)技術服務|實驗技術服務原裝,質量保證,*。
RIA(放射免疫法)技術服務|實驗技術服務——pCzn1質粒+Arctic Express宿主菌低溫表達體系。
我們具備豐富的蛋白表達設計經驗及實驗操作技巧,承諾客戶不成功不收費。在獲得重組蛋白產品的同時,我們也會提供相應的原始數據和原始圖片,不需要再額外花費精力重復實驗。另一方面,我們所有的實驗數據真實可信,我們提供原始的表達菌株和克隆質粒,客戶可以依據我們的實驗報告重復我們的實驗結果。
產品品牌:RIA(放射免疫法)技術服務|實驗技術服務   http://www.。。com/goodsid/fenleiyi/2868603/1.html    
測序實驗流程:
臨床上甲胎蛋白(AFP),癌胚抗原(CEA),8 一微球蛋白(pz—MG ),鐵蛋白(Fer),人絨毛膜促性腺激素p亞單位(HCG-13)等的檢測都是競爭性RIA法原理。競爭性RIA法,根據加樣順序與溫育次數的區別,反應方式分三種:平衡法,將非標記抗原(被測物與標準品)、抗體、標記抗原依次加入反應管,混勻后一次性溫育至反應達到動態平衡,再加分離劑分離B(復合物)與F(游離物)如:AFP,8 一MG,Fer;順序加樣法,先將非標記抗原(被測物與標準品),與抗體在反應管內作*次溫育,待反應達到動態平衡后。加入標記抗原,再作第二次溫育后,分離B與F如:CEA;急診檢測法:為臨床急需檢測結果而提出的反應方式,不等RIA 反應達到動態平衡就終止反應;分離劑的選擇有,PEG(聚乙二醇),第二抗體等。
現在一般采用的是:第二抗體與PEG合用的方法,稱為雙抗體一PEG法。
PEG原理:PEG濃度達到7 一9 時能使抗原一抗體復合物沉淀。
優點:經濟,簡便,通用。
缺點:重復性差,非特異性結合率高。
第二抗體:*抗體是可與被測抗原進行特異結合的抗體,來自家兔或豚鼠。用*抗體為抗原,作用到羊,馬身上,產生的抗*抗體的抗體稱第二抗體。第二抗體與*抗體在適當條件下發生特異性結合,生成分子量很大的免疫復合物(AgAb ×Ab ),能自然沉淀。
優點:分離效果好。非特異性結合率低。
缺點:增加經費投入。需要第二次溫育,延長了時間。
所以就產生了兩者合用的雙抗體一PEG法,它結合了上述兩種方法的優點。
二、非競爭性RIA,又稱免疫放射分析(IRMA)
主要特點:標記的是抗體。
按反應原理分為兩種:
(一)單位點IRMA
其原理:抗原只有一個抗原決定簇,所測的抗原為小分子抗原,Ab+AgAg Ab+ Ab+ ImAd—Ag ImAd—AgAb+Ag Ab(去除)(負相關):(ImAd—Ag)固相抗原免疫吸附劑,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗原;雙位點IRMA:抗原有兩個抗原決定簇,所使用的兩種亞型抗體在與同一抗原分子結合時互不干擾ImAd—Ab+AgImAd—Ab—Ag+ AbImAd-Ab—Ag- Ab+ Ab(過剩的,游離的):(ImAd—Ab)固相抗體免疫吸附劑,一般用聚苯乙烯塑料珠包被抗體。
(二)雙位點IRMA,又稱雙抗體夾心法
從加樣測定順序上看,有三種方法:固相抗體先與未知抗原結合,再與標記抗體結合(正向兩步法)。然后去除游離的標記抗體,測固相抗體一抗原一標記抗體復合物的放射性計數;未知抗原先與標記抗體結合,再與同相抗體結合(反向兩步法)。然后去除游離的標記抗體,測固相抗體一抗原一標記抗體復合物的放射性計數;未知抗原與固相抗體和標記抗體同時反應(一步法,又稱同時加樣法)。然后去除游離的標記抗體,測固相抗體一抗原一標記抗體復合物的放射性計數。
這三種方法都生成夾心狀的抗體一抗原一抗體復合物,故又稱雙抗體夾心法。
糖類抗原CA50,CA125就用的是其中的第三種方法(一步法),血清中的未知抗原與固相抗體和標記抗體同時反應,生成夾心狀的抗體一抗原一抗體復合物,然后去除游離的標記抗體,測固相抗體一抗原一標記抗體復合物的放射性計數。
三、RIA法的影響因素
pH和離子強度;反應溫度,溫度一般為37℃,也有45℃,室溫,4℃ 冰箱;反應時間,操作中的注意事項:戴手套、防護鏡等,將試劑盒從冰箱中取出,室溫下放置30 min方可使用。
(1)編號:*排是標準管:根據標準品濃度由低到高A,B,C,D,E,F,G……;第二排是被測樣品1,2,3,4,5,6,……。
(2)加樣要準確,移液器的使用(兩個檔位,一檔吸人,二檔排出)吸頭(一個標本一個吸頭,避免互相污染)。加試劑:先看瓶簽,再搖勻,zui后吸人。(標記物一般為紅色,一抗為蘭色)。
(3)溫育時間要保證:按說明書中所要求的時間溫育,可以延長,不能縮短。
(4)分離劑加入:混勻靜置時間,可以延長,不能縮短。保證抗原抗體復合物與第二抗體的充分結合。
(5)溫度:注意觀察水浴箱的水溫,誤差不能太大,為±1℃ ,室溫21℃左右。
(6)離心時間:也應按說明書中所要求來操作,轉速一般為3 500r/min。往離心機里放反應管時,盡量讓它直立(因為傾斜可能會使液體流出)。吸上清液時,沉淀物在試管底部,真空泵的吸頭頭部不能直接插人到試管底部中央(會吸走沉淀物,而我們的目的是分離保留沉淀物),應該使吸頭貼著試管管壁往下放,并且試管要稍微傾斜,但要在即將插到沉淀物邊緣時停止,快速上升取出。少留一點點上清液也可。主要是保證沉淀物完整。
(7)進人免疫計數器測量時,注意觀察做出的曲線好壞:是不是需要修改,剔除壞點。
(8)報結果:碰到異常結果,要再次看一看沉淀物是否都在,患者情況如何,結果是否與患者情況相符,方可報出。非競爭性RIA法中,清洗固相包被珠時,清洗次數要嚴格按說明書中所要求來操作,不得減少。
雖然RIA法的影響因素很多,但操作中只要注意上述事項,RIA法的穩定性還是相當不錯的。主要是它存在放射污染,這個問題不易解決,影響了它以后的發展,如今電化學發光免疫分析,化學發光免疫分析,酶聯免疫分析,磁酶免疫分析等相繼推出,發展很快,RIA法將被淘汰。

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